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第11部分

考博生化和分子生物学复习笔记-第11部分

小说: 考博生化和分子生物学复习笔记 字数: 每页4000字

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夏承┗虻囊斐1泶铩=昀从钟蟹椿虿呗浴㈦暮怂帷⒒∫蛉コ蚏NA干扰技术。
 (二)基因治疗的基本程序 1。治疗性基因的选择 选择对疾病有治疗作用的特定目的基因是基因治疗的首要问题。对于单基因缺陷的遗传病而 言,其野生型基因即可被用于基因治疗,如选用腺苷脱氨酶(ADA)基因治疗ADA缺陷导致 的重症联合免疫缺陷综合症。 2。基因载体的选择 有病毒载体有非病毒体两类,多用病毒载体,如逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒载体。3。靶细胞的选择 根据受体细胞种类的不同,基因治疗分为体细胞的基因治疗和生殖细胞的基因治疗两大类。4。基因转移 将基因导入哺乳动细胞的方法有两种:一是非病毒介导的基因转移;二是病毒介导的基因转移。非病毒介导的基因转移方法包括物理的和化学的方法等。物理方法有显微注射、电穿孔、DNA直接注射和基因枪技术等。化学方法有磷酸钙沉淀法、DEAE…葡聚糖法、脂质体 介导的基因转移等。 导入基因的方式有两种:一种是间接体内疗法,即在体外将外源基因导入靶细胞内,再将这 种基因修饰过的细胞回输病人体内,使带有外源基因的细胞在体内表达相应产物,以达到治 疗的目的。其基本过程类似于自体组织细胞移植。另一种直接体内疗法,即将外源基因直接 导人体内有关的组织器官,使其进入相应的细胞并进行表达。 5。外源基因表达筛检 利用载体中的标记基因对转染细胞进行筛选,只有稳定表达外源基因的细胞在病人体内才能 发挥治疗效应。 6。回输体内 将治疗性基因修饰的细胞以不同的方式回输体内以发挥治疗效果。
多肽链中氨基酸序列分析
  a。分析纯化蛋白质的氨基酸残基组成
  (蛋白质水解为个别氨基酸,测各氨基酸的量及在蛋白质中的百分组成)  
        ↓
   测定肽链头、尾的氨基酸残基
         二硝基氟苯法(DNP法)
   头端                     尾端 羧肽酶A、B、C法等
         丹酰氯法
              ↓  
   水解肽链,分别分析
    胰凝乳蛋白酶(糜蛋白酶)法:水解芳香族氨基酸的羧基侧肽键
    胰蛋白酶法:水解赖氨酸、精氨酸的羧基侧肽键
    溴化脯法:水解蛋氨酸羧基侧的肽键
        ↓
   Edman降解法测定各肽段的氨基酸顺序
    (氨基末端氨基酸的游离α…氨基与异硫氰酸苯酯反应形成衍生物,用层析法鉴定氨基酸种类) 
   b。通过核酸推演氨基酸序列。
   
              一、糖酵解
   1、过程:糖酵解过程中包含两个底物水平磷酸化:一为1;3…二磷酸甘油酸转变为3…磷酸甘油酸;二为磷酸烯醇式丙酮酸转变为丙酮酸。
  2、调节
  1)6-磷酸果糖激酶…1    变构抑制剂:ATP、柠檬酸
  变构激活剂:AMP、ADP、1,6…双磷酸果糖(产物反馈激,比较少见)和2,6…双磷酸果糖(最强的激活剂)。
  2)丙酮酸激酶    变构抑制剂:ATP 、肝内的丙氨酸      变构激活剂:1,6…双磷酸果糖
  3)葡萄糖激酶  变构抑制剂:长链脂酰辅酶A
  注:此项无需死记硬背,理解基础上记忆是很容易的,如知道糖酵解是产生能量的,那么有ATP等能量形式存在,则可抑制该反应,以利节能,上述的柠檬酸经三羧酸循环也是可以产生能量的,因此也起抑制作用;产物一般来说是反馈抑制的;但也有特殊,如上述的1,6…双磷酸果糖。特殊的需要记忆,只属少数。以下类同。关于共价修饰的调节,只需记住几个特殊的即可,下面章节提及。
  
    (1)糖原       1…磷酸葡萄糖
               
  (2)葡萄糖 己糖激酶 6…磷酸葡萄糖  6…磷酸果糖6…磷酸果糖…1…激酶 
       ATP ADP               ATP   ADP
              磷酸二羟丙酮         
 1;6…二磷酸果糖              
            3…磷酸甘油醛 1;3…二磷酸甘油酸
                     NAD+  NADH+H+
3…磷酸甘油酸 2…磷酸甘油酸 磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶
ADP  ATP                            ADP  ATP
丙酮酸 乳酸
   NADH+H+  NAD+
注:红色表示该酶为该反应的限速酶;蓝色ATP表示消耗,红色ATP和NADH等表示生成的能量或可以转变为能量的物质。以下类同。
3、生理意义
  1)迅速提供能量,尤其对肌肉收缩更为重要。若反应按(1)进行,可净生成3分子ATP,若反应按(2)进行,可净生成2分子ATP;另外,酵解过程中生成的2个NADH在有氧条件下经电子传递链,发生氧化磷酸化,可生成更多的ATP,但在缺氧条件下丙酮酸转化为乳酸将消耗NADH,无NADH净生成。
  2)成熟红细胞完全依赖糖酵解供能,神经、白细胞、骨髓等代谢极为活跃,即使不缺氧也常由糖酵解提供部分能量。
  3)红细胞内1,3…二磷酸甘油酸转变成的2,3…二磷酸甘油酸可与血红蛋白结合,使氧气与血红蛋白结合力下降,释放氧气。
   4)肌肉中产生的乳酸、丙氨酸(由丙酮酸转变)在肝脏中能作为糖异生的原料,生成葡萄糖。
   ☆丙酮酸的去路:
        ①丙酮酸脱氢酶系作用下,形成乙酰…CoA;      
        ②丙酮酸羧化酶作用下,形成草酰乙酸;
        ③乳酸脱氢酶作用下,生成乳酸;
        ④丙酮酸脱羧酶及乙醇脱氢酶作用下,生成乙醇;
其中③和 ④是在无氧条件下糖酵解继续进行的反应,使NADH在被氧化为NAD+。
   葡萄糖分子的第3,4位碳原子形成了2分子3…磷酸甘油醛的醛基碳原子,葡萄糖分子的第1,6位碳原子形成了3…磷酸甘油醛的第3位碳原子,第2,5位碳原子形成3…磷酸甘油醛的第2位碳原子。
   
4、乳酸循环乳酸循环 是由于肝内糖异生活跃,又有葡萄糖…6…磷酸酶可水解6…磷酸葡萄糖,释出葡萄糖。肌肉除糖异生活性低外,又没有葡萄糖…6…磷酸酶。  生理意义:避免损失乳酸以及防止因乳酸堆积引起酸中毒。
  葡萄糖 葡萄糖     葡萄糖
    糖               糖
    异               酵
    生               解
    途               途
    径               径 
  丙酮酸             丙酮酸
  
   乳酸     乳酸      乳酸 
    (肝) (血液) (肌肉)
  二、糖有氧氧化  1、过程
  1)、经糖酵解过程生成丙酮酸
  2)、丙酮酸 丙酮酸脱氢酶复合体 乙酰辅酶A
              NAD+    NADH+H+ 
    限速酶的辅酶有:TPP﹑FAD﹑NAD+﹑CoA及硫辛酸
  3)、三羧酸循环
    草酰乙酸+乙酰辅酶A 柠檬酸合成酶 柠檬酸  异柠檬酸 异柠檬酸脱氢酶 
                               NAD+    NADH+H+
  α…酮戊二酸 α…酮戊二酸脱氢酶复合体 琥珀酸酰CoA 琥珀酸
         NAD+    NADH+H+            GDP  GTP
  
       延胡索酸  苹果酸         草酰乙酸
 FAD FADH2          NAD+    NADH+H+

  三羧酸循环中限速酶α…酮戊二酸脱氢酶复合体的辅酶与丙酮酸脱氢酶复合体的辅酶同。三羧酸循环中有一个底物水平磷酸化,即琥珀酰COA转变成琥珀酸,生成GTP;加上糖酵解过程中的两个,本书中共三个底物水平磷酸化。
  2、调节
  1)丙酮酸脱氢酶复合体  抑制:乙酰辅酶A、NADH、ATP   激活:AMP、钙离子
  2)异柠檬酸脱氢酶和α…酮戊二酸脱氢酶  NADH、ATP反馈抑制
琥珀酸脱氢酶是柠檬酸循环中唯一嵌入线粒体内膜中的酶,其它酶都处于线粒体基质中。
三羧酸循环的调控——关键酶是柠檬酸合成酶、异柠檬酸脱氢酶和 α… 酮戊二酸脱氢酶。其中柠檬酸合成酶是柠檬酸循环的限速酶。最关键的物质是乙酰…CoA、草酰乙酸和产物NADH。产物抑制:如乙酰…CoA和NADH反馈抑制丙酮酸脱氢酶系;柠檬酸反馈抑制柠檬酸合成酶; 琥珀酰…CoA和NADH反馈抑制α… 酮戊二酸脱氢酶
竞争性抑制:琥珀酰…CoA 是乙酰…CoA结构类似物,竞争性抑制柠檬酸合成酶;
Ca2+和ADP的激活作用与ATP的抑制作用。
柠檬酸循环的填补反应——丙酮酸羧化反应。需CO2ATP和丙酮酸羧化酶。
3、生理意义
  1)基本生理功能是氧化供能。  2)三羧酸循环是体内糖、脂肪和蛋白质三大营养物质代谢的最终共同途径。  3)三羧酸循环也是三大代谢联系的枢纽。
  4、有氧氧化生成的ATP
  5、巴斯德效应  有氧氧化抑制糖酵解的现象。
   三、磷酸戊糖途径
1、 过程
             6…磷酸葡萄糖
              NADP+ 
                   6…磷酸葡萄糖脱氢酶
                          NADPH
               6…磷酸葡萄糖酸内酯
  
               6…磷酸葡萄糖酸
              NADP+
  
              NADPH
               5…磷酸核酮糖
  
  
               5…磷酸核糖    5…磷酸木酮糖
               
               7…磷酸景天糖   3…磷酸甘油醛
  
     5…磷酸木酮糖    4…磷酸赤藓糖   6…磷酸果糖
  
     3…磷酸甘油醛    6…磷酸果糖
  
     6…磷酸果糖
  
  2、生理意义
  1)为核酸的生物合成提供5…磷酸核糖,肌组织内缺乏6…磷酸葡萄糖脱氢酶,磷酸核糖可经酵解途径的中间产物3… 磷酸甘油醛和6…磷酸果糖经基团转移反应生成。
  2)提供NADPH
  a。NADPH是供氢体,参加各种生物合成反应,如从乙酰辅酶A合成脂酸、胆固醇;α…酮戊二酸与NADPH及氨生成谷氨酸,谷氨酸可与其他α…酮酸进行转氨基反应而生成相应的氨基酸。
  b。NADPH是谷胱甘肽还原酶的辅酶,对维持细胞中还原型谷胱甘肽的正常含量进而保护巯基酶的活性及维持红细胞膜完整性很重要,并可保持血红蛋白铁于二价。
   c。NADPH参与体内羟化反应,有些羟化反应与生物合成有关,如从胆固醇合成胆汁酸、类固醇激素等;有些羟化反应则与生物转化有关。
磷酸戊糖途径的生理意义:1。 是体内生成NADPH的主要代谢途径:NADPH在体内可用于:⑴ 作为供氢体,参与体内的合成代谢:如参与合成脂肪酸、胆固醇等。⑵ 参与羟化反应:作为加单氧酶的辅酶,参与对代谢物的羟化。⑶ 维持巯基酶的活性。⑷ 使氧化型谷胱甘肽还原。⑸ 维持红细胞膜的完整性:由于6…磷酸葡萄糖脱氢酶遗传性缺陷可导致蚕豆病,表现为溶血性贫血。 
2。 是体内生成5…磷酸核糖的唯一代谢途径:体内合成核苷酸和核酸所需的核糖或脱氧核糖均以5…磷酸核糖的形式提供,其生成方式可以由G…6…P脱氢脱羧生成,也可以由3…磷酸甘油醛和F…6…P经基团转移的逆反应生成。
  四、糖原合成与分解
  1、合成  过程:
  葡萄糖  6…磷酸葡萄糖  1…磷酸葡萄糖 UDPG焦磷酸化酶 尿苷二磷酸葡萄糖 
                      UTP  PPi     (UDPG)
  糖原合成酶 (G)n+1+UDP
   (G)n
  注:1)UDPG可看作是活性葡萄糖,在体内充作葡萄糖供体。
    2)糖原引物是指原有的细胞内较小的糖原分子,游离葡萄糖不能作为UDPG的葡萄糖基的接受体。
    3)葡萄糖基转移给糖原引物的糖链末端,形成α…1,4糖苷键。在糖原合酶作用下,糖链只能延长,不能

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